Grunnprinsippet for DNA-syntese

Den kjemiske DNA-syntesen er basert på fastfase-syntesestrategien og fosforamidittkjemi.Forskjellig fra den biologiske DNA-syntesen er materialet i kjemisk DNA-syntese DMT (4,4-dimetoksytrityl) og fosforamiditt modifisert deoksyriboksysid, som vist i figur 1. DNA-syntesen utføres på den faste bæreren(vi kan tilby ulike avOligosyntesekolonne), dvs. CPG (kontrollert poreglass) og PS (polystyren), og hele syntesen utføres på enDNA/RNA synthesizer, som er vårt hovedutstyr, har forskjellige modeller som: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 og etc, synteseretningen er fra 3' til 5', og et nukleotid introduseres til den faste bæreren via en syntese syklus.En typisk syntesesyklus inneholder fire trinn, avbeskyttelse, kobling, kapping og oksidering (figur 2).Avbeskyttelsen er satt til å fjerne DMT-gruppen på den faste bæreren eller 5'-hydroksylgruppen på det forrige nukleosid, den 3 % trikloreddiksyren i diklormetan brukes som avbeskyttelsesreagens.Deretter ble det fosforamidittmodifiserte deoksyriboksysidet tillatt å eksponere hydroksylgruppen ved hjelp av aktivator, dvs. 5-etyltiotetrazol eller 4,5-dicyanoimidazol, og dannet fosfitetriesteren (III), og realiserte koblingstrinnet.Et capping-trinn utføres for å blokkere den ureagerte hydroksylgruppen under koblingstrinn, for å minimere dannelsen av uønskede defektsekvenser.Til slutt blir den ustabile fosfitetriesteren (III) oksidert til kjemisk stabil fosfortriester (V) med jod som oksidant i pyridin tilstede.

Det syntetiserte DNA kan spaltes fra den faste bæreren ved aminolyse, den 2-cyanoetylbeskyttede gruppen på fosfortriesteren og amidet på nukleobasen spaltes samtidig, synteseplatene og syntesesøylene i stativer plasseres direkte i reaksjonskammeret avAvbeskyttelsesutstyr.Rå-DNA kan fremstilles ved HPLC, elektroforese og OPC på forespørsel, vi kan også gi deg detRenseutstyrfor etterbehandling.